●使用 RIPA 提取的總蛋白總結(jié)●: 1. 并非是真正意義上的總蛋白,相當(dāng)一部分蛋白丟失在棄去的不可溶組分中。 2. 很多常用的內(nèi)參,如 Actin,tubulin,LaminA,H3 等均在 RIPA 不可溶組分中被丟失。 3. 目標(biāo)蛋白可能會(huì)在 RIPA 不可溶組分中被丟失,也可能不被丟失,具有不可預(yù)見(jiàn)性,非選擇性。 4. 同種蛋白在不同樣品中丟失的情況并不相同,蛋白丟失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和內(nèi)參比值做校正會(huì)出現(xiàn)偏差,不適合 WB 目的蛋白的半定量分析。
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酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)蛋白含量變化的實(shí)驗(yàn)技術(shù),常用的檢測(cè)方法是用抗原包被孔板,然后用一抗和二抗檢測(cè)抗原的變化。這里使用兩種抗體的原因一方面是信號(hào)放大的需要,另一方面是要減少成本。假如每種抗體都用酶或者熒光素標(biāo)記的話,那將會(huì)需要多少種標(biāo)記的抗體呢?而且可以肯定價(jià)格一定不菲。而用標(biāo)記二抗的方法就可以大大減少需要標(biāo)記抗體的數(shù)目,同時(shí)也能提高標(biāo)記抗體的效用,這樣就能用盡量少的標(biāo)記抗體滿足盡量多的實(shí)驗(yàn)要求。
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編輯:小檀20180914
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