酶聯(lián)免疫檢測法檢測原理以及本方法的優(yōu)點? ● 原理:酶聯(lián)免疫吸附試驗法的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。 在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。 再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關,故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。 ● 優(yōu)點:具有很高的特異性;另一方面由于酶標記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結合物,它可以催化底物分子發(fā)生反應,產(chǎn)生放大作用,正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性;ELISA法還具有簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點,且適用于大批量標本的檢測。
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酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)已經(jīng)成為實驗室常用的檢測蛋白含量變化的實驗技術,常用的檢測方法是用抗原包被孔板,然后用一抗和二抗檢測抗原的變化。這里使用兩種抗體的原因一方面是信號放大的需要,另一方面是要減少成本。假如每種抗體都用酶或者熒光素標記的話,那將會需要多少種標記的抗體呢?而且可以肯定價格一定不菲。而用標記二抗的方法就可以大大減少需要標記抗體的數(shù)目,同時也能提高標記抗體的效用,這樣就能用盡量少的標記抗體滿足盡量多的實驗要求。
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編輯:小檀20180914
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