●怎樣判斷體外診斷試劑的技術(shù)性能?● 答:體外診斷試劑的性能主要體現(xiàn)在三個方面:1、分析性能:主要包括精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度、特異性、線性范圍或測定范圍等項目,體現(xiàn)在產(chǎn)品說明書中某些技術(shù)指標(biāo)可能存在不完全一致的情況。2、診斷性能:對被檢測物質(zhì)的敏感性與特異性程度。3、穩(wěn)定性:產(chǎn)品的生產(chǎn)日期、失效期、有效期,以及校準(zhǔn)要求等。 試劑所用的原材料與工藝,應(yīng)當(dāng)有明確的質(zhì)量要求,并且是經(jīng)過驗證的,終產(chǎn)品的性能符合臨床使用要求。 影響產(chǎn)品性能的主要因素有原材料、工藝及反應(yīng)體系的建立、性能評估方式方法、企業(yè)內(nèi)部參考品的確立、臨床評價等。
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●穩(wěn)定轉(zhuǎn)染●:即進(jìn)入細(xì)胞的質(zhì)粒整合入細(xì)胞基因組中,并能隨細(xì)胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。這是相對瞬時轉(zhuǎn)染而言的。 瞬時轉(zhuǎn)染的表達(dá)時間短暫,外源基因?qū)胝匣蚪M的幾率非常低,絕大部分以游離形式存在,不能隨細(xì)胞分裂而一同復(fù)制,導(dǎo)致后拷貝數(shù)被稀釋,無法達(dá)到持續(xù)表達(dá)外源基因的目的。一般用轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,多為瞬時轉(zhuǎn)染。 ●一般如下情況需要構(gòu)建穩(wěn)定株●: 1. 長期在目的細(xì)胞中研究基因功能,通過構(gòu)建穩(wěn)定株,可以大大降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本,也極大方便實驗研究; 2. 部分蛋白半衰期極長,瞬時 RNA 只能干擾表達(dá),無法去除已經(jīng)表達(dá)的目的蛋白,通過構(gòu)建穩(wěn)定株可以實現(xiàn)更好的基因干擾效果; 3. 瞬轉(zhuǎn)往往會引入極高拷貝數(shù)的表達(dá),導(dǎo)致因為人為因素造成實驗結(jié)果的不**,構(gòu)建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細(xì)胞進(jìn)行實驗研究; 4. 需要用誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的,主要是一些致死基因或者是需要時空表達(dá)的; 5. 需要用細(xì)胞做動物實驗的,比如裸鼠成瘤等,往往需要構(gòu)建成穩(wěn)轉(zhuǎn)株。
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編輯:小檀20180925
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