核因子的激活T細(xì)胞亞型c4ELISA試劑盒 嚴(yán)格質(zhì)控
● 試劑盒操作步驟如下： ●
1.用TBS或PBS制備蛋白樣品的稀釋液。稀釋度要取決于樣品中存在的抗原濃度。由于抗原濃度通常未知，因此有必要檢測(cè)寬范圍的稀釋度。
2.制備硝酸纖維素膜，用鉛筆標(biāo)上每個(gè)待測(cè)一抗/二抗的濃度。所需轉(zhuǎn)印膜的數(shù)量取決于待篩查的一抗和/或二抗有多少種不同的稀釋濃度。通常來(lái)說(shuō)，一抗要檢測(cè)一到兩個(gè)稀釋度，而二抗要檢測(cè)兩到三個(gè)稀釋度。
3.將硝酸纖維素膜放在濾紙上,將抗原稀釋液點(diǎn)在膜上。每個(gè)點(diǎn)的體積越少越好(1-5μl)，以保證點(diǎn)盡可能地小。如果需要使用5μl以上的樣品，在點(diǎn)完一次后,干燥2-5分鐘,再點(diǎn)一次。讓膜干燥10-15分鐘，或直至無(wú)可見(jiàn)水分。
4.用封閉液封閉膜上的非特異性位點(diǎn)，室溫震蕩孵育1h。
5.用包含1/10體積封閉液的洗滌液稀釋一抗，并加到膜上，室溫震蕩孵育1h。
6.用洗滌液洗膜4次，每次5分鐘，用盡可能大體積的洗脫液。
7.用包含1/10體積封閉液的洗滌液稀釋二抗，并加到膜上，室溫震蕩孵育1h。
8.用洗滌液洗膜4次，每次5分鐘，用盡可能大體積的洗脫液。
9.準(zhǔn)備底物工作液。白介素1ELISA試劑盒廠家制備足夠體積的工作液,以確保印跡點(diǎn)完全濕潤(rùn),且印跡點(diǎn)在孵育過(guò)程中不會(huì)干。
10.將膜放在底物工作液中孵育5分鐘。
11.將膜取出,放在塑料布或其它防護(hù)膜上。
12.蛋白一側(cè)朝上,將印跡貼到膠片上,曝光30-60秒。為獲得*結(jié)果,曝光時(shí)間可能不同。如果*次曝光不夠,再試試2-5分鐘。
13.在一張優(yōu)化好的印跡膜上,底物產(chǎn)生的信號(hào)可能會(huì)持續(xù)6-24小時(shí),這取決于具體的產(chǎn)品。
氫ATP酶ELISA試劑盒(多種種屬)實(shí)驗(yàn)科研認(rèn)可品牌
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酶聯(lián)免疫檢測(cè)法檢測(cè)原理以及本方法的優(yōu)點(diǎn)?
● 原理：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。
在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。
再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
● 優(yōu)點(diǎn)：具有很高的特異性;另一方面由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生放大作用，正因?yàn)榇朔N放大作用而使本法具有很高的敏感性;ELISA法還具有簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)，且適用于大批量標(biāo)本的檢測(cè)。
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編輯：小檀20180925