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●使用 RIPA 提取的總蛋白總結(jié)●: 1. 并非是真正意義上的總蛋白,相當(dāng)一部分蛋白丟失在棄去的不可溶組分中。 2. 很多常用的內(nèi)參,如 Actin,tubulin,LaminA,H3 等均在 RIPA 不可溶組分中被丟失。 3. 目標(biāo)蛋白可能會(huì)在 RIPA 不可溶組分中被丟失,也可能不被丟失,具有不可預(yù)見(jiàn)性,非選擇性。 4. 同種蛋白在不同樣品中丟失的情況并不相同,蛋白丟失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和內(nèi)參比值做校正會(huì)出現(xiàn)偏差,不適合 WB 目的蛋白的半定量分析。

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●半定量●:是將各樣品目的蛋白量分別除以其內(nèi)參含量,得到的數(shù)值即為內(nèi)參校正后的各樣品中目的蛋白相對(duì)含量,再用此數(shù)值進(jìn)行樣品間的比較和分析,得到目的蛋白含量在不同樣品間的實(shí)際變化結(jié)果,是一個(gè)比值差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 ●內(nèi)部參照●:內(nèi)參即是內(nèi)部參照(Internal Control),對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白(Housekeeping Proteins),它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定,在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物,借助檢測(cè)每個(gè)樣品內(nèi)參的量就可以用于校正上樣誤差,這樣半定量的結(jié)果才更為可信。

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編輯:小檀20180917