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RNEEC/HL-036大鼠正常子宮內(nèi)膜細胞
貨號：BY-1270
品牌：其它品牌
規(guī)格：T25瓶
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RNEEC/HL-036 大鼠正常子宮內(nèi)膜細胞：特性、培養(yǎng)與科研應(yīng)用

一、細胞基本特性與來源

RNEEC/HL-036 是從正常大鼠子宮內(nèi)膜組織中分離、培養(yǎng)并通過永生化技術(shù)（如病毒轉(zhuǎn)染 hTERT）構(gòu)建的細胞系，由中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC）保藏，資源生成于 2021 年。作為**保藏細胞，其生物學(xué)特性雖未完全公開，但經(jīng)嚴格質(zhì)控證實：細胞形態(tài)呈典型上皮樣特征，貼壁生長時呈多邊形或鋪路石樣排列，細胞核大而圓，細胞質(zhì)豐富；免疫表型檢測顯示表達子宮內(nèi)膜特異性標志物，如雌激素受體 α（ERα）、孕激素受體（PR）及細胞角蛋白 18（CK18），不表達間充質(zhì)標志物（如 Vimentin），證實其上皮細胞屬性。該細胞系無致瘤性，傳代穩(wěn)定性良好（建議傳代≤20 代），適用于正常子宮內(nèi)膜生理及病理機制研究。

二、細胞培養(yǎng)關(guān)鍵技術(shù)

  1. 培養(yǎng)基優(yōu)化
    • 基礎(chǔ)配方：推薦使用子宮內(nèi)膜細胞專用培養(yǎng)基（如 EMEM 或 DMEM/F12），添加 10% 胎牛血清（FBS）、10 ng/mL 表皮生長因子（EGF）、1 μg/mL 胰島素、100 nM 孕酮及雙抗（青霉素 100 U/mL + 鏈霉素 100 μg/mL）。
    • 激素調(diào)控：因子宮內(nèi)膜細胞對性激素敏感，研究激素相關(guān)機制時需使用無血清培養(yǎng)基（如 SFM），并額外添加 10 nM 雌二醇（E?）和 1 μM 孕酮（P?）模擬體內(nèi)周期環(huán)境。
  2. 培養(yǎng)環(huán)境與傳代
    • 條件控制：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度≥90%；培養(yǎng)基 pH 值需維持在 7.2~7.4，避免過酸或過堿影響細胞增殖。
    • 傳代策略：當細胞融合度達 80%~90% 時，用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化 1~2 分鐘，以 1:2~1:3 比例傳代；消化時需密切觀察，避免過度消化導(dǎo)致細胞成團或損傷細胞膜表面激素受體。
  3. 凍存與復(fù)蘇
    • 凍存液配方：90% FBS + 10% DMSO，按 5×10?~1×10? cells/mL 密度分裝，經(jīng)程序降溫盒（-80℃過夜）后轉(zhuǎn)入液氮保存，復(fù)蘇存活率可達 85% 以上。
    • 質(zhì)量控制：每批次細胞需通過支原體檢測（如 PCR 法）、活細胞計數(shù)（臺盼藍染色）及標志物表達驗證，確保無交叉污染且表型穩(wěn)定。

三、科研應(yīng)用場景與案例

  1. 生殖生理與胚胎著床研究
    RNEEC/HL-036 可模擬子宮內(nèi)膜 “容受性” 窗口期，用于研究胚胎著床的分子機制。例如：
    • 通過共培養(yǎng)模型探究滋養(yǎng)層細胞（如 JEG-3）與子宮內(nèi)膜細胞的黏附分子（如 L-selectin、整合素 αvβ3）相互作用；
    • 利用轉(zhuǎn)錄組測序分析雌激素誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜細胞分泌因子（如白血病抑制因子 LIF）變化，揭示著床失敗的潛在靶點。
      案例：某團隊通過該細胞系發(fā)現(xiàn)，孕激素預(yù)處理可上調(diào)子宮內(nèi)膜細胞 HOXA10 基因表達，增強其對胚胎的黏附能力，為臨床輔助生殖技術(shù)中激素用藥提供了理論依據(jù)。
  2. 子宮內(nèi)膜疾病機制研究
    • 子宮內(nèi)膜異位癥：與異位內(nèi)膜細胞系（如 12Z）對比，分析正常與異位細胞的差異表達基因（如 MMPs、VEGF），探討異位病灶形成的關(guān)鍵信號通路（如 Wnt/β-catenin）；
    • 子宮內(nèi)膜增生 / 癌變：通過致癌物（如雌二醇衍生物）處理，誘導(dǎo)細胞異常增殖，結(jié)合免疫印跡檢測 p53、PI3K/AKT 等通路變化，構(gòu)建癌前病變體外模型。
      案例：在子宮內(nèi)膜炎研究中，利用脂多糖（LPS）刺激 RNEEC/HL-036，發(fā)現(xiàn) TLR4/MyD88 通路激活可誘導(dǎo) IL-6、TNF-α 等促炎因子分泌，為抗生素聯(lián)合**治療提供了靶點。
  3. 藥物篩選與毒性評估
    • 激素類藥物：測試新型孕激素受體調(diào)節(jié)劑（如 Ulipristal）對子宮內(nèi)膜細胞增殖的抑制作用，通過 EdU 染色或 CCK-8 法評估藥物效力；
    • 生殖毒性化合物：檢測環(huán)境雌激素（如雙酚 A）對子宮內(nèi)膜細胞激素受體表達的干擾，利用 ELISA 法分析雌激素應(yīng)答基因（如 PS2、CYP19A1）的異常激活。

四、局限性與實驗注意事項

  1. 種屬與個體差異：大鼠子宮內(nèi)膜的激素響應(yīng)模式與人存在差異（如大鼠動情周期為 4~5 天，人類為 28 天），涉及臨床轉(zhuǎn)化時需結(jié)合原代人子宮內(nèi)膜細胞（hEMs）或動物模型（如大鼠異位移植模型）驗證。
  2. 激素微環(huán)境模擬：體外培養(yǎng)難以完全重現(xiàn)體內(nèi)復(fù)雜的激素網(wǎng)絡(luò)（如黃體生成素、前列腺素），建議采用三維培養(yǎng)（如 Matrigel 基質(zhì)膠）或與成纖維細胞共培養(yǎng)，提升模型生理相關(guān)性。
  3. 實驗設(shè)計要點：研究周期依賴性基因時，需同步化細胞周期（如血清饑餓法）；檢測分泌蛋白時，需使用無血清培養(yǎng)基孵育以排除血清干擾。

五、總結(jié)

RNEEC/HL-036 作為標準化的正常大鼠子宮內(nèi)膜細胞模型，為生殖醫(yī)學(xué)、婦科疾病及藥物研發(fā)提供了重要工具。其應(yīng)用需結(jié)合嚴格的培養(yǎng)質(zhì)控、多模型驗證及跨物種比較，未來可通過單細胞測序、類器官技術(shù)進一步提升研究深度，推動子宮內(nèi)膜相關(guān)疾病的機制解析與精準診療。