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RNTEC/HL-025 大鼠正常氣管上皮細(xì)胞：特性、培養(yǎng)與科研應(yīng)用

一、細(xì)胞基本特性

二、細(xì)胞培養(yǎng)與維護(hù)

1. 培養(yǎng)基與環(huán)境
   • 推薦培養(yǎng)基：采用專門的氣道上皮細(xì)胞培養(yǎng)基（如 SAGM 或 RNTEC 專用培養(yǎng)基），含胎牛血清（FBS，5%~10%）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白等生長(zhǎng)因子，以及雙抗（青霉素 100 U/mL + 鏈霉素 100 μg/mL）。
   • 培養(yǎng)條件：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度維持在 95% 以上，避免培養(yǎng)基快速蒸發(fā)導(dǎo)致 pH 值波動(dòng)。
2. 傳代與凍存
   • 傳代時(shí)機(jī)：細(xì)胞融合度達(dá) 80%~90% 時(shí)進(jìn)行傳代，采用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化液（含 0.02% EDTA）消化 1~2 分鐘，待細(xì)胞變圓后及時(shí)終止消化，吹打制成單細(xì)胞懸液，傳代比例建議 1:2~1:3。
   • 凍存方法：凍存液配方為 90% FBS + 10% DMSO，按每管 1×10?~5×10?細(xì)胞密度分裝，經(jīng)程序降溫盒（-80℃過夜）后轉(zhuǎn)入液氮保存，避免細(xì)胞因溫度驟變死亡。
3. 質(zhì)量控制
   • 污染檢測(cè)：定期通過顯微鏡觀察培養(yǎng)基是否渾濁、細(xì)胞形態(tài)是否異常，結(jié)合支原體檢測(cè)試劑盒（如 PCR 法）排除微生物污染。
   • 表型驗(yàn)證：通過免疫熒光或流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)上皮標(biāo)志物（如 CK19、E-cadherin），確保細(xì)胞未發(fā)生間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）；同時(shí)檢測(cè)是否表達(dá) Clara 細(xì)胞分泌蛋白（CC10）等氣道特異性蛋白，確認(rèn)細(xì)胞來源的正確性。

三、科研應(yīng)用場(chǎng)景

1. 呼吸系統(tǒng)毒理學(xué)研究
   RNTEC/HL-025 可用于評(píng)估空氣污染物（如 PM2.5、香煙煙霧提取物）、職業(yè)粉塵或化學(xué)毒素對(duì)氣道上皮的損傷機(jī)制。例如，通過檢測(cè)細(xì)胞毒性（MTT 法）、氧化應(yīng)激指標(biāo)（ROS 水平）或炎癥因子（IL-6、IL-8）分泌，分析有害物質(zhì)對(duì)氣道屏障功能的影響。
2. 氣道疾病模型對(duì)照
   在**、慢性阻塞性肺疾?。–OPD）或肺纖維化研究中，該細(xì)胞系可作為正常對(duì)照，與病理狀態(tài)下的氣道上皮細(xì)胞（如永生化的病變細(xì)胞系）進(jìn)行差異分析。例如，比較正常與炎癥刺激下的緊密連接蛋白表達(dá)變化，探討氣道高反應(yīng)性的分子機(jī)制。
3. 藥物遞送系統(tǒng)評(píng)價(jià)
   利用 RNTEC/HL-025 的單層上皮屏障特性（可通過跨上皮電阻 TEER 值評(píng)估），模擬呼吸道黏膜屏障，測(cè)試吸入型藥物（如納米顆粒、脂質(zhì)體）的滲透性和生物相容性，為藥物劑型優(yōu)化提供體外數(shù)據(jù)。
4. 病毒感染與宿主相互作用
   作為呼吸道病毒（如流感病毒、鼻病毒）的易感細(xì)胞模型，可研究病毒黏附、侵入及復(fù)制機(jī)制，或評(píng)估抗病毒藥物（如奧司他韋）的抑制效果。

四、局限性與注意事項(xiàng)

1. 特性限制：盡管通過永生化實(shí)現(xiàn)了無限增殖，RNTEC/HL-025 仍可能隨傳代次數(shù)增加出現(xiàn)輕微表型漂移（如生長(zhǎng)速率減慢），建議傳代次數(shù)控制在 15~20 代以內(nèi)，并定期進(jìn)行表型驗(yàn)證。
2. 種屬差異：大鼠氣道上皮與人類存在一定差異（如纖毛細(xì)胞比例、黏液分泌細(xì)胞類型），在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中需結(jié)合人源細(xì)胞（如 NHBE 細(xì)胞）或動(dòng)物模型（如大鼠吸入暴露實(shí)驗(yàn)）綜合分析。
3. 培養(yǎng)細(xì)節(jié)：避免使用含 Ca2?濃度過高的培養(yǎng)基，以防誘導(dǎo)細(xì)胞分化；傳代時(shí)消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，以免損傷細(xì)胞表面受體影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)（如病毒感染實(shí)驗(yàn)）。

五、典型應(yīng)用案例

• 案例 1：某團(tuán)隊(duì)利用 RNTEC/HL-025 研究電zi煙煙霧冷凝物（CSC）對(duì)氣道上皮的毒性，發(fā)現(xiàn) CSC 可劑量依賴性降低細(xì)胞活力，并通過激活 NF-κB 通路誘導(dǎo) IL-8 分泌，為電zi煙的呼吸道損傷機(jī)制提供了證據(jù)。
• 案例 2：在構(gòu)建氣道上皮 - 免疫細(xì)胞共培養(yǎng)模型時(shí)，RNTEC/HL-025 與大鼠肺泡巨噬細(xì)胞（NR8383）共培養(yǎng)可模擬過敏原（如塵螨提取物）誘導(dǎo)的 Th2 型免疫反應(yīng)，用于過敏性**的早期炎癥研究。