999精品亚洲国产欧美-免费av在线观看亚洲-亚洲欧美日韩另类丝袜一区-乱码精品一区二区三区

RMC 大鼠腎系膜細(xì)胞簡(jiǎn)介

起源與背景

細(xì)胞特性

1. 形態(tài)與生長(zhǎng)特性
   • 形態(tài)：貼壁生長(zhǎng)，呈梭形或星形，具有長(zhǎng)的細(xì)胞突起，匯合時(shí)可形成多層生長(zhǎng)（部分克隆因永生化特性可能喪失接觸抑制）。
   • 增殖能力：永生性細(xì)胞系，可長(zhǎng)期傳代（通常建議使用 20 代以內(nèi)細(xì)胞以保持特性穩(wěn)定），增殖速度中等，傳代周期約 3~5 天（密度達(dá) 70%~80% 時(shí)傳代）。
2. 功能特性
   • 基質(zhì)合成：可合成和分泌 IV 型膠原、層粘連蛋白、纖連蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分，其表達(dá)水平受細(xì)胞因子（如 TGF-β、IL-1β）調(diào)控，模擬病理狀態(tài)下系膜基質(zhì)增生（如糖尿病腎病中的系膜擴(kuò)張）。
   • 炎癥與免疫反應(yīng)：對(duì)脂多糖（LPS）、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）、血管緊張素 II（Ang II）等刺激敏感，可釋放炎癥因子（如 TNF-α、IL-6）和趨化因子（如 MCP-1），參與腎小球內(nèi)炎癥細(xì)胞募集。
   • 收縮功能：表達(dá)平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA），具有類似平滑肌的收縮特性，可響應(yīng)血管活性物質(zhì)（如去甲腎上腺素）調(diào)節(jié)腎小球?yàn)V過(guò)率。

培養(yǎng)與保存

1. 培養(yǎng)條件
   • 培養(yǎng)基：常用含 10% 胎牛血清（FBS）的 DMEM 培養(yǎng)基（高糖或低糖型，根據(jù)研究需求選擇，如高糖培養(yǎng)基可模擬糖尿病環(huán)境），添加 1% 青霉素 - 鏈霉素雙抗。
   • 環(huán)境：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度 95% 以上，pH 維持 7.2~7.4。
   • 傳代方法：0.25% 胰酶 - EDTA 消化法，消化時(shí)間約 2~3 分鐘（鏡下觀察細(xì)胞變圓、突起收縮時(shí)終止消化），離心后重懸接種，傳代比例通常為 1:3~1:4。
2. 凍存與復(fù)蘇
   • 凍存液：含 10% DMSO、20% FBS 的 DMEM 培養(yǎng)基，細(xì)胞密度調(diào)整為 1×10?~5×10? cells/mL，程序降溫（-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)液氮）。
   • 復(fù)蘇要點(diǎn)：37℃水浴快速解凍，輕柔離心去除凍存液，避免機(jī)械損傷，接種后 24 小時(shí)更換培養(yǎng)基以清除死細(xì)胞。

應(yīng)用領(lǐng)域

1. 糖尿病腎病研究
   • 模擬高糖、晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖和基質(zhì)過(guò)度合成，探究 TGF-β/Smad 通路在腎纖維化中的作用。
   • 評(píng)估降糖藥物（如 GLP-1 受體激動(dòng)劑）或抗纖維化藥物（如吡非尼酮）對(duì)系膜細(xì)胞功能的調(diào)控。
2. 腎小球腎炎機(jī)制研究
   • 分析炎癥因子（如 IL-17、IFN-γ）或自身抗體誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞活化，研究補(bǔ)體系統(tǒng)激活與系膜細(xì)胞損傷的關(guān)系。
   • 篩選免疫抑制劑（如環(huán)孢素 A）對(duì)系膜細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抑制效果。
3. 細(xì)胞外基質(zhì)代謝研究
   • 探討基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）及其抑制劑（TIMPs）在系膜基質(zhì)降解中的平衡，研究 ECM 沉積的分子機(jī)制（如 Wnt/β-catenin 通路激活）。
4. 信號(hào)通路與藥物篩選
   • 常用于研究 PI3K/Akt、MAPK（ERK/JNK/p38）、NF-κB 等通路在系膜細(xì)胞增殖、凋亡或炎癥中的作用。
   • 高通量篩選潛在的腎臟保護(hù)劑，如抗氧化劑（N - 乙酰半胱氨酸）或抗血小板藥物。

局限性與注意事項(xiàng)

• 永生化影響：部分 RMC 細(xì)胞系因 SV40 轉(zhuǎn)染可能高表達(dá)大 T 抗原，導(dǎo)致 p53 等抑癌基因功能異常，與原代系膜細(xì)胞的生物學(xué)行為（如增殖調(diào)控）存在差異，需結(jié)合原代細(xì)胞驗(yàn)證。
• 模型局限性：體外培養(yǎng)的系膜細(xì)胞缺乏腎小球內(nèi)復(fù)雜的細(xì)胞間相互作用（如與內(nèi)皮細(xì)胞、足細(xì)胞的接觸），研究結(jié)果需結(jié)合體內(nèi)模型（如大鼠抗 Thy1.1 腎炎模型）進(jìn)一步確認(rèn)。
• 培養(yǎng)條件優(yōu)化：高糖培養(yǎng)基可能加速細(xì)胞衰老，建議根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇培養(yǎng)基類型，并定期通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)或 β- 半乳糖苷酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老狀態(tài)。