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IEC-6 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞簡介

起源與背景

細(xì)胞特性

1. 形態(tài)與生長特性
   • 形態(tài)：貼壁生長，呈鵝卵石樣或多邊形鋪路石狀排列，細(xì)胞間連接緊密，融合后形成單層上皮樣結(jié)構(gòu)。
   • 增殖能力：永生性細(xì)胞系，可無限傳代（建議使用 20 代以內(nèi)以保持未分化表型），增殖速度快，倍增時間約 18-24 小時，密度達(dá) 80%-90% 時需傳代。
2. 表型與功能特性
   • 分化狀態(tài)：
     • 未成熟隱窩表型：高表達(dá)隱窩干細(xì)胞標(biāo)志物（如 Lgr5、Musashi-1）和增殖標(biāo)志物（Ki-67、PCNA），但不表達(dá)成熟腸上皮細(xì)胞標(biāo)志物（如絨毛膜堿性磷酸酶、二肽基肽酶 IV）。
     • 誘導(dǎo)分化潛能：在特定條件下（如撤除生長因子、添加維甲酸或丁酸鈉），可向絨毛上皮細(xì)胞分化，表達(dá)腸上皮細(xì)胞分化標(biāo)志物（如細(xì)胞角蛋白 20、E - 鈣粘蛋白）。
   • 功能模擬：
     • 腸道屏障研究：可形成具有緊密連接（如 ZO-1、Occludin）的單層細(xì)胞，用于評估細(xì)菌（如大腸桿菌）、毒素（如脂多糖 LPS）或藥物對腸道通透性的影響。
     • 營養(yǎng)吸收與代謝：表達(dá)葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白（GLUT2）、氨基酸轉(zhuǎn)運體（如 B0AT1）等，可研究營養(yǎng)素（如葡萄糖、谷氨酰胺）的跨膜運輸機制。
     • 炎癥與應(yīng)激響應(yīng)：對細(xì)胞因子（如 TNF-α、IL-1β）敏感，可用于研究腸上皮細(xì)胞在炎癥性腸病（IBD）中的信號通路（如 NF-κB、MAPK）激活機制。

培養(yǎng)與保存

1. 培養(yǎng)條件
   • 培養(yǎng)基：經(jīng)典配方為含 5% 胎牛血清（FBS）的 Dulbecco's 改良 Eagle 培養(yǎng)基（DMEM），需額外添加 10 μg/mL 胰島素和 5 μg/mL 轉(zhuǎn)鐵蛋白（ITS 添加劑）以支持增殖，部分實驗室添加 1% 青霉素 - 鏈霉素雙抗。
   • 環(huán)境：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度 95% 以上，pH 維持 7.2-7.4。
   • 傳代方法：0.25% 胰酶 - EDTA 消化（約 3-5 分鐘，待細(xì)胞變圓后輕柔吹打），傳代比例通常為 1:3-1:4，避免過度匯合導(dǎo)致分化。
2. 凍存與復(fù)蘇
   • 凍存液：含 10% DMSO、20% FBS 的 DMEM 培養(yǎng)基，細(xì)胞密度調(diào)整為 1×10?-5×10? cells/mL，程序降溫（-80℃過夜后轉(zhuǎn)液氮）。
   • 復(fù)蘇要點：37℃水浴快速解凍，離心去除凍存液后接種于含 10% FBS 的培養(yǎng)基中，24 小時內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)基以清除死細(xì)胞。

應(yīng)用領(lǐng)域

1. 腸道上皮增殖與分化機制
   • 研究 Wnt/β-catenin、Notch 等信號通路對隱窩干細(xì)胞自我更新的調(diào)控，例如通過敲低 β-catenin 觀察細(xì)胞增殖抑制。
   • 探討轉(zhuǎn)錄因子（如 HNF4α、Cdx2）在腸上皮細(xì)胞向絨毛細(xì)胞分化中的作用，通過誘導(dǎo)分化模型驗證基因功能。
2. 腸道屏障功能研究
   • 利用跨上皮電阻（TEER）測定或熒光黃（Lucifer Yellow）滲透實驗，評估炎癥因子、益生菌（如羅伊氏乳桿菌）或腸道菌群代謝物（如短鏈脂肪酸）對屏障完整性的影響。
   • 研究腸漏癥（Leaky Gut）模型中緊密連接蛋白的降解機制，如 LPS 誘導(dǎo)的 Occludin 內(nèi)吞或 ZO-1 磷酸化。
3. 營養(yǎng)與藥物吸收研究
   • 分析膳食成分（如膳食纖維、多酚）對腸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運功能的影響，例如槲皮素對 GLUT2 介導(dǎo)的葡萄糖吸收的抑制作用。
   • 評估口服藥物的腸道毒性或生物利用度，如化療藥物 5 - 氟尿嘧啶（5-FU）對 IEC-6 細(xì)胞增殖和凋亡的影響。
4. 腸道炎癥與疾病模型
   • 模擬潰瘍性結(jié)腸炎（UC）或克羅恩?。–D）的腸上皮損傷，通過共培養(yǎng)體系研究免疫細(xì)胞（如 T 細(xì)胞）與 IEC-6 的相互作用。
   • 篩選**藥物（如美沙拉嗪、姜黃素）的作用靶點，檢測其對 NF-κB 通路激活的抑制效果。

局限性與注意事項

• 分化局限性：IEC-6 為未成熟隱窩細(xì)胞，缺乏成熟腸上皮細(xì)胞（如杯狀細(xì)胞、潘氏細(xì)胞）的特征，研究絨毛功能時需結(jié)合 IEC-18（成熟小腸上皮細(xì)胞系）或原代細(xì)胞。
• 血清依賴性：培養(yǎng)基中血清成分可能影響實驗重復(fù)性，建議使用低血清（如 2%-5%）或無血清培養(yǎng)基（添加重組生長因子）進(jìn)行機制研究。
• 傳代次數(shù)影響：高代次細(xì)胞可能出現(xiàn)增殖能力下降或自發(fā)分化，建議定期檢測標(biāo)志物（如 Ki-67、Lgr5）以確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)。