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人嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)試劑盒，
檢測范圍：歡迎QQ或電話索取原版說明書. 產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T。 主要成分：酶標板,試劑,標準品等 經(jīng)營種類：進口分裝和原裝、國產(chǎn) 性狀：盒裝液體 試劑盒保存：2-8℃低溫保存。 標本：血清、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。 ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA等。 預期應用：ELISA法定量測定血清、、細胞培養(yǎng)上清或其它相關生物液體中的含量。
●分子實驗中常用生化試劑原理匯總● 5．在用乙醇沉淀DNA時，為什么一定要加NaAc或NaCl至終濃度達0.1～0.25mol/L？在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的負電荷，減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀，當加入的鹽溶液濃度太低時，只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，這樣就造成DNA沉淀不完全，當加入的鹽溶液濃度太高時，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于過多的鹽雜質(zhì)存在，影響DNA的酶切等反應，必須要進行洗滌或重沉淀。 6．加核糖核酸酶降解核糖核酸后，為什么再要用SDS與KAc來處理？加進去的RNase本身是一種蛋白質(zhì)，為了純化DNA，又必須去除之，加SDS可使它們成為SDS-蛋白復合物沉淀，再加KAc使這些復合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式的SDS-蛋白質(zhì)復合物，使沉淀更加完全。也可用飽和酚、氯仿抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到較好效果。 7．為什么在保存或抽提DNA過程中，一般采用TE緩沖液？在基因操作實驗中，選擇緩沖液的主要原則是考慮DNA的穩(wěn)定性及緩沖液成分不產(chǎn)生干擾作用。磷酸鹽緩沖系統(tǒng)（pKa＝7.2）和硼酸系統(tǒng)（pKa=9.24）等雖然也都符合細胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pH)，可作DNA的保存液，但在轉(zhuǎn)化實驗時，磷酸根離子的種類及數(shù)量將與Ca2＋產(chǎn)生Ca3(PO4)2沉淀；在DNA反應時，不同的酶對輔助因子的種類及數(shù)量要求不同，有的要求高離子濃度，有的則要求低鹽濃度，采用Tris-HCl（pKa=8.0）的緩沖系統(tǒng)，由于緩沖液是TrisH+/Tris，不存在金屬離子的干擾作用，故在提取或保存DNA時，大都采用Tris-HCl系統(tǒng)，而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定DNA的活性。 8．如何選擇聚乙二醇（6000）的濃度來沉淀DNA？采用PEG（6000）沉淀DNA，大小不同的DNA分子所用的PEG的濃度也不同，PEG的濃度低，選擇性沉淀DNA分子量大，大分子所需PEG的濃度只需1％左右，小分子所需PEG濃度高達20％。本實驗選擇性沉淀4.3kb的pBR322質(zhì)粒DNA，每毫升加入0.4毫升的30％ PEG，其終PEG濃度為12％。PEG選擇性沉淀DNA的分辨率大約100bp。 9．抽提DNA去除蛋白質(zhì)時，怎樣使用酚與氯仿較好？酞與氯仿是非極性分子，水是極性分子，當?shù)鞍姿芤号c酚或氯仿混合時，蛋白質(zhì)分子之間的水分子就被酚或氯仿擠去，使蛋白失去水合狀態(tài)而變性。經(jīng)過離心，變性蛋白質(zhì)的密度比水的密度為大，因而與水相分離，沉淀在水相下面，從而與溶解在水相中的DNA分開。而酚與氯仿有機溶劑比重更大，保留在下層。作為表面變性的酚與氯仿，在去除蛋白質(zhì)的作用中，各有利弊，酚的變性作用大，但酚與水相有一定程度的互溶，大約10％～15％的水溶解在酚相中，因而損失了這部分水相中的DNA，而氯仿的變性作用不如酚效果好，但氯仿與水不相混溶，不會帶走DNA。所以在抽提過程中，混合使用酚與氯仿效果好。經(jīng)酚**次抽提后的水相中有殘留的酚，由于酚與氯仿是互溶的，可用氯仿**次變性蛋白質(zhì)，此時一起將酚帶走。也可以在**次抽提時，將酚與氯仿混合（1:1）使用。
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編輯：小檀20181229
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