ELISA應(yīng)用：ELISA檢測技術(shù)早在19世紀(jì)70，80年代就開發(fā)出來用于替代放射性同位素標(biāo)記技術(shù)用于研究蛋白質(zhì)間的相互作用（配體-受體，抗原-抗體），到如今已經(jīng)接近50年的歷史了。這個技術(shù)從科研的角度來說已經(jīng)不具備**性，沒有太多的價值，不值得專門進(jìn)行研究，更多的是一個使用的工具。工業(yè)應(yīng)用落后于基礎(chǔ)研究，ELISA技術(shù)在制藥領(lǐng)域的應(yīng)用隨著近20年生物制藥領(lǐng)域的迅猛發(fā)展展現(xiàn)著越來越多的使用價值，當(dāng)然ELISA的應(yīng)用情況也越來越復(fù)雜，這樣的復(fù)雜性也使得早期的基礎(chǔ)研究并不再具有很好的指導(dǎo)意義，ELISA方法濫用錯用往往導(dǎo)致實驗結(jié)果出現(xiàn)系統(tǒng)性偏差，影響實驗結(jié)果的真實性，做出錯誤的選擇。本文的寫作目的旨在作為文獻(xiàn)之外關(guān)于ELISA實際應(yīng)用的一個總結(jié)，反補基礎(chǔ)研究的不足，使得該技術(shù)更具使用價值。
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檢測范圍：歡迎QQ或電話索取原版說明書. 產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T。 主要成分：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等 經(jīng)營種類：進(jìn)口分裝和原裝、國產(chǎn) 性狀：盒裝液體 試劑盒保存：2-8℃低溫保存。 標(biāo)本：血清、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。 ELISA常用的方法：雙抗體夾心法、間接法、競爭法以及BAS-ELISA等。 預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定血清、、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。
●分子實驗中常用生化試劑原理匯總● 1．溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌體細(xì)胞壁的主要化學(xué)成分肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵，因而具有溶菌的作用。當(dāng)溶液中pH小于8時，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，維持滲透壓，防止DNA受機械剪切力作用而降解。 EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金屬離子，抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用（DNase作用時需要一定的金屬離子作輔基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因為溶菌酶的反應(yīng)要求有較低的離子強度的環(huán)境。 2．NaOH－SDS液： NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是穩(wěn)定的。但當(dāng)pH＞12或pH＜3時，就會引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1／L，加抽提液時，該系統(tǒng)的pH就高達(dá)12.6，因而促使染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性。 SDS：SDS是離子型表面活性劑。它主要功能有：（1）溶解細(xì)胞膜上的脂質(zhì)與蛋白，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜。（2）解聚細(xì)胞中的核蛋白。（3）SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為R-O-SO3-…R＋-蛋白質(zhì)的復(fù)合物，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取過程中，必須把它去除干凈，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA時）受到干擾。 3. 3mol／L NaAc（pH4.8）溶液： NaAc的水溶液呈堿性，為了調(diào)節(jié)pH至4.8，必須加入大量的冰醋酸。所以該溶液實際上是NaAc-HAc的緩沖液。用pH4.8的NaAc溶液是為了把pH12.6的抽提液，調(diào)回pH至中性，使變性的質(zhì)粒DNA能夠復(fù)性，并能穩(wěn)定存在。而高鹽的3mol／L NaAc有利于變性的大分子染色體DNA、RNA以及SDS-蛋白復(fù)合物凝聚而沉淀之。前者是因為中和核酸上的電荷，減少相斥力而互相聚合，后者是因為鈉鹽與SDS－蛋白復(fù)合物作用后，能形成較小的鈉鹽形式復(fù)合物，使沉淀更完全。 4．為什么用無水乙醇沉淀DNA？用無水乙醇沉淀DNA，這是實驗中常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點是可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng)，對DNA很**，因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時，乙醇會奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般實驗中，是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合，其乙醇的終含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇來替代無水乙醇（因為無水乙醇的價格遠(yuǎn)遠(yuǎn)比95％乙醇昂貴）。但是加95％的乙醇使總體積增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA損失也增大，尤其用多次乙醇沉淀時，就會影響收得率。折中的做法是初次沉淀DNA時可用95％乙醇代替無水乙酵，后的沉淀步驟要使用無水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA。一般在室溫下放置15－30分鐘即可。
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編輯：小檀20181214
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