ELISA應(yīng)用:ELISA檢測(cè)技術(shù)早在19世紀(jì)70,80年代就開(kāi)發(fā)出來(lái)用于替代放射性同位素標(biāo)記技術(shù)用于研究蛋白質(zhì)間的相互作用(配體-受體,抗原-抗體),到如今已經(jīng)接近50年的歷史了。這個(gè)技術(shù)從科研的角度來(lái)說(shuō)已經(jīng)不具備**性,沒(méi)有太多的價(jià)值,不值得專門進(jìn)行研究,更多的是一個(gè)使用的工具。工業(yè)應(yīng)用落后于基礎(chǔ)研究,ELISA技術(shù)在制藥領(lǐng)域的應(yīng)用隨著近20年生物制藥領(lǐng)域的迅猛發(fā)展展現(xiàn)著越來(lái)越多的使用價(jià)值,當(dāng)然ELISA的應(yīng)用情況也越來(lái)越復(fù)雜,這樣的復(fù)雜性也使得早期的基礎(chǔ)研究并不再具有很好的指導(dǎo)意義,ELISA方法濫用錯(cuò)用往往導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)系統(tǒng)性偏差,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性,做出錯(cuò)誤的選擇。本文的寫作目的旨在作為文獻(xiàn)之外關(guān)于ELISA實(shí)際應(yīng)用的一個(gè)總結(jié),反補(bǔ)基礎(chǔ)研究的不足,使得該技術(shù)更具使用價(jià)值。
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●使用 RIPA 提取的總蛋白總結(jié)●: 1. 并非是真正意義上的總蛋白,相當(dāng)一部分蛋白丟失在棄去的不可溶組分中。 2. 很多常用的內(nèi)參,如 Actin,tubulin,LaminA,H3 等均在 RIPA 不可溶組分中被丟失。 3. 目標(biāo)蛋白可能會(huì)在 RIPA 不可溶組分中被丟失,也可能不被丟失,具有不可預(yù)見(jiàn)性,非選擇性。 4. 同種蛋白在不同樣品中丟失的情況并不相同,蛋白丟失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和內(nèi)參比值做校正會(huì)出現(xiàn)偏差,不適合 WB 目的蛋白的半定量分析。
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編輯:小檀20181019
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