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嚴格質控 白介素15ELISA試劑盒

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●(多種屬)操作流程●: 1. 檢測試劑盒(多種屬)從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。 2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL; 3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。 4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。 6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

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●穩(wěn)定轉染●:即進入細胞的質粒整合入細胞基因組中,并能隨細胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。這是相對瞬時轉染而言的。 瞬時轉染的表達時間短暫,外源基因導入整合基因組的幾率非常低,絕大部分以游離形式存在,不能隨細胞分裂而一同復制,導致后拷貝數(shù)被稀釋,無法達到持續(xù)表達外源基因的目的。一般用轉染試劑進行質粒轉染,多為瞬時轉染。 ●一般如下情況需要構建穩(wěn)定株●: 1. 長期在目的細胞中研究基因功能,通過構建穩(wěn)定株,可以大大降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本,也極大方便實驗研究; 2. 部分蛋白半衰期極長,瞬時 RNA 只能干擾表達,無法去除已經(jīng)表達的目的蛋白,通過構建穩(wěn)定株可以實現(xiàn)更好的基因干擾效果; 3. 瞬轉往往會引入極高拷貝數(shù)的表達,導致因為人為因素造成實驗結果的不**,構建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細胞進行實驗研究; 4. 需要用誘導表達系統(tǒng)的,主要是一些致死基因或者是需要時空表達的; 5. 需要用細胞做動物實驗的,比如裸鼠成瘤等,往往需要構建成穩(wěn)轉株。

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編輯:小檀20180925