酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)已經(jīng)成為實驗室常用的檢測蛋白含量變化的實驗技術(shù),常用的檢測方法是用抗原包被孔板,然后用一抗和二抗檢測抗原的變化。這里使用兩種抗體的原因一方面是信號放大的需要,另一方面是要減少成本。假如每種抗體都用酶或者熒光素標(biāo)記的話,那將會需要多少種標(biāo)記的抗體呢?而且可以肯定價格一定不菲。而用標(biāo)記二抗的方法就可以大大減少需要標(biāo)記抗體的數(shù)目,同時也能提高標(biāo)記抗體的效用,這樣就能用盡量少的標(biāo)記抗體滿足盡量多的實驗要求。
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簡述利用異羥肟酸鐵快速檢驗氟乙酰胺的原理,簡述此方法檢測固體樣品的過程? ● 檢測原理:氟乙酰胺與羥胺在堿性條件下,生成異羥肟酸,與三價鐵離子作用生成色異羥肟酸絡(luò)合物。檢出限50μg/ml。 ●方法:取待檢液1ml左右于試管中(同時取一份同等量的蒸餾水或純凈水于另一試管中做陰性對照實驗),各加鹽酸羥胺溶液5滴,加氫氧化鈉溶液10滴,置沸水中水浴10分鐘以上,取出放冷后,加鹽酸溶液調(diào)整溶液pH值到3~4之間,加三氯化鐵溶液3~4滴,觀察溶液顏色變化情況,陽性結(jié)果為粉紅或紫紅色。 ●固體過程:取2g~5g搗碎后的樣品,加3倍于樣品重的純凈水,充分振搖,靜置或過濾得到1mL左右的澄清液。測定:取待檢液1mL左右于試管中,加氫氧化鈉溶液10滴,加鹽酸羥胺溶液5滴,置沸水中水浴10min,取出放冷,加鹽酸溶液調(diào)pH值3~5后,加三氯化鐵溶液3~10滴,陽性結(jié)果為粉紅或紫紅色,陰性結(jié)果為淺黃或黃色。
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編輯:小檀20180925
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