這些你必須知道! 血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子ELISA試劑盒
血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子ELISA試劑盒 這些你必須知道!
ELISA應(yīng)用:ELISA檢測(cè)技術(shù)早在19世紀(jì)70,80年代就開發(fā)出來用于替代放射性同位素標(biāo)記技術(shù)用于研究蛋白質(zhì)間的相互作用(配體-受體,抗原-抗體),到如今已經(jīng)接近50年的歷史了。這個(gè)技術(shù)從科研的角度來說已經(jīng)不具備**性,沒有太多的價(jià)值,不值得專門進(jìn)行研究,更多的是一個(gè)使用的工具。工業(yè)應(yīng)用落后于基礎(chǔ)研究,ELISA技術(shù)在制藥領(lǐng)域的應(yīng)用隨著近20年生物制藥領(lǐng)域的迅猛發(fā)展展現(xiàn)著越來越多的使用價(jià)值,當(dāng)然ELISA的應(yīng)用情況也越來越復(fù)雜,這樣的復(fù)雜性也使得早期的基礎(chǔ)研究并不再具有很好的指導(dǎo)意義,ELISA方法濫用錯(cuò)用往往導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)系統(tǒng)性偏差,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性,做出錯(cuò)誤的選擇。本文的寫作目的旨在作為文獻(xiàn)之外關(guān)于ELISA實(shí)際應(yīng)用的一個(gè)總結(jié),反補(bǔ)基礎(chǔ)研究的不足,使得該技術(shù)更具使用價(jià)值。
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血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子ELISA試劑盒,本應(yīng)用試劑盒已完成多中心臨床驗(yàn)證,并通過國家食藥監(jiān)總局的認(rèn)證。我司通過建立覆蓋歐美的全球采購中心,與歐美1000多個(gè)品牌建立了正式的代理與合作,涵蓋所有的生物試劑門類,特別是二三線高質(zhì)量品牌產(chǎn)品,具有壓倒性地優(yōu)勢(shì)。產(chǎn)品領(lǐng)域:分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)菌學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、細(xì)胞治療、臨床應(yīng)用等領(lǐng)域。主營產(chǎn)品:流式抗體、ELISA試劑盒、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品、生化試劑、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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●分子實(shí)驗(yàn)中常用生化試劑原理匯總●
5.在用乙醇沉淀DNA時(shí),為什么一定要加NaAc或NaCl至終濃度達(dá)0.1~0.25mol/L?在pH為8左右的溶液中,DNA分子是帶負(fù)電荷的,加一定濃度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的負(fù)電荷,減少DNA分子之間的同性電荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀,當(dāng)加入的鹽溶液濃度太低時(shí),只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合,這樣就造成DNA沉淀不完全,當(dāng)加入的鹽溶液濃度太高時(shí),其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于過多的鹽雜質(zhì)存在,影響DNA的酶切等反應(yīng),必須要進(jìn)行洗滌或重沉淀。
6.加核糖核酸酶降解核糖核酸后,為什么再要用SDS與KAc來處理?加進(jìn)去的RNase本身是一種蛋白質(zhì),為了純化DNA,又必須去除之,加SDS可使它們成為SDS-蛋白復(fù)合物沉淀,再加KAc使這些復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物,使沉淀更加完全。也可用飽和酚、氯仿抽提再沉淀,去除RNase。在溶液中,有人以KAc代替NaAc,也可以收到較好效果。
7.為什么在保存或抽提DNA過程中,一般采用TE緩沖液?在基因操作實(shí)驗(yàn)中,選擇緩沖液的主要原則是考慮DNA的穩(wěn)定性及緩沖液成分不產(chǎn)生干擾作用。磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(pKa=7.2)和硼酸系統(tǒng)(pKa=9.24)等雖然也都符合細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pH),可作DNA的保存液,但在轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時(shí),磷酸根離子的種類及數(shù)量將與Ca2+產(chǎn)生Ca3(PO4)2沉淀;在DNA反應(yīng)時(shí),不同的酶對(duì)輔助因子的種類及數(shù)量要求不同,有的要求高離子濃度,有的則要求低鹽濃度,采用Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統(tǒng),由于緩沖液是TrisH+/Tris,不存在金屬離子的干擾作用,故在提取或保存DNA時(shí),大都采用Tris-HCl系統(tǒng),而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定DNA的活性。
8.如何選擇聚乙二醇(6000)的濃度來沉淀DNA?采用PEG(6000)沉淀DNA,大小不同的DNA分子所用的PEG的濃度也不同,PEG的濃度低,選擇性沉淀DNA分子量大,大分子所需PEG的濃度只需1%左右,小分子所需PEG濃度高達(dá)20%。本實(shí)驗(yàn)選擇性沉淀4.3kb的pBR322質(zhì)粒DNA,每毫升加入0.4毫升的30% PEG,其終PEG濃度為12%。PEG選擇性沉淀DNA的分辨率大約100bp。
9.抽提DNA去除蛋白質(zhì)時(shí),怎樣使用酚與氯仿較好?酞與氯仿是非極性分子,水是極性分子,當(dāng)?shù)鞍姿芤号c酚或氯仿混合時(shí),蛋白質(zhì)分子之間的水分子就被酚或氯仿擠去,使蛋白失去水合狀態(tài)而變性。經(jīng)過離心,變性蛋白質(zhì)的密度比水的密度為大,因而與水相分離,沉淀在水相下面,從而與溶解在水相中的DNA分開。而酚與氯仿有機(jī)溶劑比重更大,保留在下層。作為表面變性的酚與氯仿,在去除蛋白質(zhì)的作用中,各有利弊,酚的變性作用大,但酚與水相有一定程度的互溶,大約10%~15%的水溶解在酚相中,因而損失了這部分水相中的DNA,而氯仿的變性作用不如酚效果好,但氯仿與水不相混溶,不會(huì)帶走DNA。所以在抽提過程中,混合使用酚與氯仿效果好。經(jīng)酚**次抽提后的水相中有殘留的酚,由于酚與氯仿是互溶的,可用氯仿**次變性蛋白質(zhì),此時(shí)一起將酚帶走。也可以在**次抽提時(shí),將酚與氯仿混合(1:1)使用。
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編輯:小檀20180925