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酶聯(lián)免疫剖析試劑盒 6酮前列腺素ELISA試劑盒

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細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí),內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA,但核小體本身由于由組蛋白緊密結(jié)合而免受切割,單克隆抗體可以與核小體形成夾心結(jié)構(gòu),可通過檢測(cè)核小體判斷細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡事件。 原理:●細(xì)胞凋亡的發(fā)生,是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進(jìn)入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180bp~200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu),可特異性檢測(cè)細(xì)胞溶解物中的核小體片段。

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6酮前列腺素ELISA試劑盒試劑盒(多種屬)行業(yè)操作流程如下: (1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl?!? (2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。 (3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。 (4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl?!? (5)酶標(biāo)板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min?!? (6)洗板,同(4)?!? (7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔工作液 100μl?!? (8)酶標(biāo)板置37℃箱的濕盒內(nèi),孵育60min?!? (9)洗板,同(4)?!? (10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。  (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。  (12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以由容器上的劃痕或指印等造成的光。 (13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定。

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編輯:小檀20180925