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ELISA方法可以分為兩類。**類：生物大分子的定量，**類：親和力測定評價或者篩選。抗體的穩(wěn)轉(zhuǎn)、瞬和發(fā)酵過程的表達量監(jiān)控，細胞因子的監(jiān)控，體內(nèi)抗體藥物的藥代動力學，藥效生物標志物的含量檢測和免疫原性測定等可劃分為**類使用目的，雜交瘤的滴度測定，噬菌體展示的淘選篩選，體外抗體和對應靶點蛋白或細胞表面受體的親和力評價可劃分為**類使用目的。使用目的不一樣，即使使用同樣的試劑材料，也會有不同實驗模式和擬合曲線。下面小編將以某抗體的定量的方法開發(fā)（**類目的）和親和力檢測方法開發(fā)（**類目的）為例，對不同使用目的開發(fā)策略進行介紹。

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β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1ELISA試劑盒試劑盒（多種屬）行業(yè)操作流程如下： （1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。　 （2）酶標板置4℃，包被過夜。 （3）洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。 （4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF工作液50μl?！? （5）酶標板置37℃箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。　 （6）洗板，同（4）?！? （7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔工作液 100μl?！? （8）酶標板置37℃箱的濕盒內(nèi)，孵育60min?！? （9）洗板，同（4）?！? （10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min?！? （11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應?！? （12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以由容器上的劃痕或指印等造成的光。 （13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定。

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編輯：小檀20180925