引起 ELISA 測(cè)定結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)不一致的原因主要有三點(diǎn),試劑因素、標(biāo)本因素和操作因素。 試劑因素:1. 試劑應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便的試劑。 2.不同廠家的試劑一定不能混用,包括底物和洗滌液。由于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)有差異,還有抗體、檢測(cè)方法、試劑、交叉反應(yīng)等因素都會(huì)導(dǎo)致對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果不一致。如:有的廠家酶標(biāo)板孔間 CV 值大于 20%,標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性比較差,使用劣質(zhì)的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。 3. 要注意試劑的批號(hào)和出廠日期,雖然試劑的有效期多為 1 年,好選擇剛出廠的試劑盒。 4. 避免選擇假的 ELISA 試劑盒。有些廠家為夸大生產(chǎn) ELISA 的指標(biāo)范圍,用一種指標(biāo)來冒充其它指標(biāo),造成各種種屬、各種指標(biāo)都可以做的假象。 標(biāo)本因素和操作因素: 血清是常用的 ELISA 標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。 內(nèi)源性物質(zhì):有人認(rèn)為大約 40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測(cè)結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。 外源性物質(zhì):外源性物質(zhì)常常是由于用于 ELISA 測(cè)定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。
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腎上腺素ELISA試劑盒,本應(yīng)用試劑盒已完成多中心臨床驗(yàn)證,并通過國(guó)家食藥監(jiān)總局的認(rèn)證。我司通過建立覆蓋歐美的全球采購(gòu)中心,與歐美1000多個(gè)品牌建立了正式的代理與合作,涵蓋所有的生物試劑門類,特別是二三線高質(zhì)量品牌產(chǎn)品,具有壓倒性地優(yōu)勢(shì)。產(chǎn)品領(lǐng)域:分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)菌學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、細(xì)胞治療、臨床應(yīng)用等領(lǐng)域。主營(yíng)產(chǎn)品:流式抗體、ELISA試劑盒、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品、生化試劑、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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●利用干擾實(shí)驗(yàn)即可鑒別ELISA試劑盒是否檢測(cè)目的抗原,方法如下:● (1) 將針對(duì)試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測(cè)抗體配置成antibody: antigen= 1:2的混合孵育液 (2) 37℃孵育15分鐘后,代替原試劑盒中的檢測(cè)抗體 (3) 后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行,加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物 (4)實(shí)驗(yàn)完畢后,檢測(cè)其標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配,試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是非目的抗原,該試劑盒為偽劣假造ELISA試劑盒。 (5) 如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無線性,則說明試劑盒檢測(cè)抗體已被目的抗原中和或干擾,影響了其實(shí)際試劑盒抗體的檢測(cè)作用,則該試劑盒檢測(cè)抗體針對(duì)的是目的抗原。
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編輯:小檀20180921
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