細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí),內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA,但核小體本身由于由組蛋白緊密結(jié)合而免受切割,單克隆抗體可以與核小體形成夾心結(jié)構(gòu),可通過檢測(cè)核小體判斷細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡事件。 原理:●細(xì)胞凋亡的發(fā)生,是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進(jìn)入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180bp~200bp或其倍數(shù)的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu),可特異性檢測(cè)細(xì)胞溶解物中的核小體片段。
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簡(jiǎn)述利用異羥肟酸鐵快速檢驗(yàn)氟乙酰胺的原理,簡(jiǎn)述此方法檢測(cè)固體樣品的過程? ● 檢測(cè)原理:氟乙酰胺與羥胺在堿性條件下,生成異羥肟酸,與三價(jià)鐵離子作用生成色異羥肟酸絡(luò)合物。檢出限50μg/ml。 ●方法:取待檢液1ml左右于試管中(同時(shí)取一份同等量的蒸餾水或純凈水于另一試管中做陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn)),各加鹽酸羥胺溶液5滴,加氫氧化鈉溶液10滴,置沸水中水浴10分鐘以上,取出放冷后,加鹽酸溶液調(diào)整溶液pH值到3~4之間,加三氯化鐵溶液3~4滴,觀察溶液顏色變化情況,陽性結(jié)果為粉紅或紫紅色。 ●固體過程:取2g~5g搗碎后的樣品,加3倍于樣品重的純凈水,充分振搖,靜置或過濾得到1mL左右的澄清液。測(cè)定:取待檢液1mL左右于試管中,加氫氧化鈉溶液10滴,加鹽酸羥胺溶液5滴,置沸水中水浴10min,取出放冷,加鹽酸溶液調(diào)pH值3~5后,加三氯化鐵溶液3~10滴,陽性結(jié)果為粉紅或紫紅色,陰性結(jié)果為淺黃或黃色。
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編輯:小檀20180921