作為一種生物產(chǎn)品,抗體的效果很容易隨批次而變化??尚哦容^高的抗體供應(yīng)商現(xiàn)在通常會(huì)向科研人員提供數(shù)據(jù),來(lái)介紹他們目錄中的每一種抗體是如何被驗(yàn)證的。有自主測(cè)試能力的實(shí)驗(yàn)室也可以自行檢驗(yàn)他們所訂購(gòu)的抗體。在實(shí)驗(yàn)中計(jì)劃使用的特定實(shí)驗(yàn)流程也是采購(gòu)中應(yīng)該考慮的因素。沒(méi)有報(bào)告抗體來(lái)源和貨號(hào)的論文其實(shí)很難重復(fù)。為了獲得大的可靠性,研究人員應(yīng)該嘗試用同一批次的抗體進(jìn)行一系列的實(shí)驗(yàn)。
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●使用 RIPA 提取的總蛋白總結(jié)●: 1. 并非是真正意義上的總蛋白,相當(dāng)一部分蛋白丟失在棄去的不可溶組分中。 2. 很多常用的內(nèi)參,如 Actin,tubulin,LaminA,H3 等均在 RIPA 不可溶組分中被丟失。 3. 目標(biāo)蛋白可能會(huì)在 RIPA 不可溶組分中被丟失,也可能不被丟失,具有不可預(yù)見(jiàn)性,非選擇性。 4. 同種蛋白在不同樣品中丟失的情況并不相同,蛋白丟失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和內(nèi)參比值做校正會(huì)出現(xiàn)偏差,不適合 WB 目的蛋白的半定量分析。
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編輯:小檀20180918
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