酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)已經(jīng)成為實驗室常用的檢測蛋白含量變化的實驗技術(shù),常用的檢測方法是用抗原包被孔板,然后用一抗和二抗檢測抗原的變化。這里使用兩種抗體的原因一方面是信號放大的需要,另一方面是要減少成本。假如每種抗體都用酶或者熒光素標(biāo)記的話,那將會需要多少種標(biāo)記的抗體呢?而且可以肯定價格一定不菲。而用標(biāo)記二抗的方法就可以大大減少需要標(biāo)記抗體的數(shù)目,同時也能提高標(biāo)記抗體的效用,這樣就能用盡量少的標(biāo)記抗體滿足盡量多的實驗要求。
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●控制和消除誤差的方法:● 誤差的大小,直接關(guān)系到分析結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度。減少誤差的措施有如下幾種: 1、正確選取樣品量 樣品量的多少與分析結(jié)果的準(zhǔn)確度關(guān)系很大。在常量分析中,滴定量或重量過多或過少都直接影響準(zhǔn)確度。在比色分析中,含量與吸光度之間往往只在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。這就要求測定時讀數(shù)在此范圍內(nèi),以提高準(zhǔn)確度。通過增減取樣量或改變稀釋倍數(shù)可以達(dá)到此目的。 2、增加平行測定次數(shù) 減少偶然誤差測定次數(shù)越多,則平均值就越接近真實值,偶然誤差亦可抵消,所以分析結(jié)果就越可靠。一般要求每個樣品的測定次數(shù)不應(yīng)少于兩次,如要更**的測定,分析次數(shù)應(yīng)更多些。 3、對照試驗 對照試驗是檢查系統(tǒng)誤差的有效方法。在進(jìn)行對照試驗時,常常用已知結(jié)果的試樣與被測試樣一起按完全相同的步驟操作,或由不同單位、不同人員進(jìn)行測定,后將結(jié)果進(jìn)行比較。這樣可以抵消許多不明了因素引起的誤差。 4、空白試驗 在進(jìn)行樣品測定過程的同時,采用完全相同的操作方法和試劑,惟獨不加被測定的物質(zhì),進(jìn)行空白試驗。在測定值中扣除空白值,就可以抵消由于試劑中的雜質(zhì)干擾等因素造成的系統(tǒng)誤差。 5、校正儀器和標(biāo)定溶液 各種計量測試儀器,如實驗室電子天平、旋光儀、分光光度計,以及移液管、滴定管、容量瓶等,在**的分析中必須進(jìn)行校準(zhǔn),并在計算時采用較正值。各種標(biāo)準(zhǔn)溶液(尤其是容易變化的試劑)應(yīng)按規(guī)定定期標(biāo)定,以保證標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和質(zhì)量。 6、嚴(yán)格遵守操作規(guī)程 分析方法所規(guī)定的技術(shù)條件要嚴(yán)格遵守。經(jīng)國家或主管部門規(guī)定的分析方法,在未經(jīng)有關(guān)部門同意下,不應(yīng)隨意改動。
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編輯:小檀20180918
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