●外源性物質(zhì) ●: 外源性物質(zhì)經(jīng)常是由于用于ELISA測定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集 不全和采血管中添加物等影響。 (1)標(biāo)本溶血 由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的 ELISA測定中,會導(dǎo)致非特異性顯色,干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用,標(biāo)本采集時必須注重避免溶血。 (2)標(biāo)本受細(xì)菌污染 因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。 (3)標(biāo)本保存不當(dāng) 在冰箱中保存過久的標(biāo)本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成 假陽性;標(biāo)本放置時間過長(如**以上),有時抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,ELISA測定的血清 標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。 (4)標(biāo)本凝集不全 在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下,正常血液采集后1/2~2h開始凝固,18~24h完全凝固。臨床檢驗(yàn)工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清,此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成 肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;這類情況于次日復(fù)查時因血凝已完全,血清中不再有纖維蛋白原存在,故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用,解決的辦法好是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽? (5)標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響 抗凝劑(如肝素,EDTA)、酶抑制劑(如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性)及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。 綜上所述,對臨床檢驗(yàn)ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果,在考慮試劑因素和操作因素之外,更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分 析,并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用,從而為臨床提供正確可靠的檢測結(jié)果。 公司的服務(wù)挺好,挺專業(yè)的,周期不延期。滿意
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簡述利用試劑盒法測定毒鼠強(qiáng)的原理并簡述此方法檢測固體樣品的過程? ● 試劑盒法檢測原理:毒鼠強(qiáng)可與二羥基萘二磺酸發(fā)生反應(yīng)變?yōu)榈仙?,本方法檢出限為1ug,低檢出濃度為2ug/ml,濃度高時可變?yōu)樯罴t色。 ● 檢測固體樣品過程:取2mL或2g樣品放入比色管中,加入5mL乙酸乙酯,充分振搖,靜置,取上清液2mL于試管中或表面皿上,在 85℃左右水浴中加熱,待乙酸乙酯剩余1mL以下時,提高水浴溫度揮干余液,放至室溫后,加入1mL的純凈水充分溶解殘?jiān)尤?滴毒鼠強(qiáng)顯色劑,輕輕搖勻,加入 5mL毒鼠強(qiáng)試液,輕輕搖動后,將試管放入90℃以上水浴中,加熱5min后取出,觀察顏色變化。溶液顏色變?yōu)榈霞t色為毒鼠強(qiáng)陽性反應(yīng),隨著毒鼠強(qiáng)濃度增加,紫色加深。
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編輯:小檀20180917
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