酶聯(lián)免疫檢測法檢測原理以及本方法的優(yōu)點(diǎn)? ● 原理:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。 在測定時(shí),受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。 再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。 ● 優(yōu)點(diǎn):具有很高的特異性;另一方面由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物,它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生放大作用,正因?yàn)榇朔N放大作用而使本法具有很高的敏感性;ELISA法還具有簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn),且適用于大批量標(biāo)本的檢測。
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酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室常用的檢測蛋白含量變化的實(shí)驗(yàn)技術(shù),常用的檢測方法是用抗原包被孔板,然后用一抗和二抗檢測抗原的變化。這里使用兩種抗體的原因一方面是信號(hào)放大的需要,另一方面是要減少成本。假如每種抗體都用酶或者熒光素標(biāo)記的話,那將會(huì)需要多少種標(biāo)記的抗體呢?而且可以肯定價(jià)格一定不菲。而用標(biāo)記二抗的方法就可以大大減少需要標(biāo)記抗體的數(shù)目,同時(shí)也能提高標(biāo)記抗體的效用,這樣就能用盡量少的標(biāo)記抗體滿足盡量多的實(shí)驗(yàn)要求。
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編輯:小檀20180914
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