●穩(wěn)定轉(zhuǎn)染●:即進(jìn)入細(xì)胞的質(zhì)粒整合入細(xì)胞基因組中,并能隨細(xì)胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。這是相對瞬時(shí)轉(zhuǎn)染而言的。 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的表達(dá)時(shí)間短暫,外源基因?qū)胝匣蚪M的幾率非常低,絕大部分以游離形式存在,不能隨細(xì)胞分裂而一同復(fù)制,導(dǎo)致后拷貝數(shù)被稀釋,無法達(dá)到持續(xù)表達(dá)外源基因的目的。一般用轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,多為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。 ●一般如下情況需要構(gòu)建穩(wěn)定株●: 1. 長期在目的細(xì)胞中研究基因功能,通過構(gòu)建穩(wěn)定株,可以大大降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本,也極大方便實(shí)驗(yàn)研究; 2. 部分蛋白半衰期極長,瞬時(shí) RNA 只能干擾表達(dá),無法去除已經(jīng)表達(dá)的目的蛋白,通過構(gòu)建穩(wěn)定株可以實(shí)現(xiàn)更好的基因干擾效果; 3. 瞬轉(zhuǎn)往往會(huì)引入極高拷貝數(shù)的表達(dá),導(dǎo)致因?yàn)槿藶橐蛩卦斐蓪?shí)驗(yàn)結(jié)果的不**,構(gòu)建穩(wěn)定株可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究; 4. 需要用誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的,主要是一些致死基因或者是需要時(shí)空表達(dá)的; 5. 需要用細(xì)胞做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的,比如裸鼠成瘤等,往往需要構(gòu)建成穩(wěn)轉(zhuǎn)株。
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編輯:小檀20180911
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