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●使用 RIPA 提取的總蛋白總結(jié)●： 1. 并非是真正意義上的總蛋白，相當(dāng)一部分蛋白丟失在棄去的不可溶組分中。 2. 很多常用的內(nèi)參，如 Actin，tubulin，LaminA，H3 等均在 RIPA 不可溶組分中被丟失。 3. 目標(biāo)蛋白可能會在 RIPA 不可溶組分中被丟失，也可能不被丟失，具有不可預(yù)見性，非選擇性。 4. 同種蛋白在不同樣品中丟失的情況并不相同，蛋白丟失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和內(nèi)參比值做校正會出現(xiàn)偏差，不適合 WB 目的蛋白的半定量分析。

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ELISA方法可以分為兩類。**類：生物大分子的定量，**類：親和力測定評價或者篩選?？贵w的穩(wěn)轉(zhuǎn)、瞬和發(fā)酵過程的表達(dá)量監(jiān)控，細(xì)胞因子的監(jiān)控，體內(nèi)抗體藥物的藥代動力學(xué)，藥效生物標(biāo)志物的含量檢測和免疫原性測定等可劃分為**類使用目的，雜交瘤的滴度測定，噬菌體展示的淘選篩選，體外抗體和對應(yīng)靶點(diǎn)蛋白或細(xì)胞表面受體的親和力評價可劃分為**類使用目的。使用目的不一樣，即使使用同樣的試劑材料，也會有不同實(shí)驗?zāi)Ｊ胶蛿M合曲線。下面小編將以某抗體的定量的方法開發(fā)（**類目的）和親和力檢測方法開發(fā)（**類目的）為例，對不同使用目的開發(fā)策略進(jìn)行介紹。

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編輯：小檀20180911