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酶聯(lián)免疫檢測法檢測原理以及本方法的優(yōu)點? ● 原理:酶聯(lián)免疫吸附試驗法的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。 在測定時,受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。 再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。 ● 優(yōu)點:具有很高的特異性;另一方面由于酶標(biāo)記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物,它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生放大作用,正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性;ELISA法還具有簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點,且適用于大批量標(biāo)本的檢測。

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●分析數(shù)據(jù)的處理:● 通常,測定工作獲得一系列有關(guān)數(shù)據(jù)以后,需按以下原則記錄、運算和處理。 1、記錄與運算規(guī)則 主要說明食品分析中數(shù)據(jù)記錄與計算,其均按有效數(shù)字計算法則進(jìn)行,即: ① 除特殊規(guī)定外,一般可疑數(shù)為后一位,有±1個單位的誤差; ② 復(fù)雜運算時,其中間過程可多保留一位,后結(jié)果需取應(yīng)有的位數(shù); ③ 加減法計算的結(jié)果,其小數(shù)點以后保留的位數(shù),應(yīng)與參加運算各數(shù)中小數(shù)點后位數(shù)小的相同; ④ 乘除法計算的結(jié)果,其有效數(shù)字保留的位數(shù)應(yīng)與參加運算各數(shù)中有效數(shù)字位數(shù)少者相同; 2、可疑值的取舍 同一樣品進(jìn)行多次測定,常發(fā)現(xiàn)個別數(shù)據(jù)與其他數(shù)據(jù)相差較大,對這些不如意的數(shù)據(jù)不能任意棄去。除非分析者有足夠的理由確證這些數(shù)值是由于某種偶然過失或外來干擾而剔除外,否則都應(yīng)當(dāng)依據(jù)誤差理論來確定這些數(shù)據(jù)的取舍。 3、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 用吸光光度法、熒光光度法、原子吸收光度法、色譜分析法對某些成分進(jìn)行測定時,常常需要制備一套具有一定梯度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,測定其系數(shù)(吸光度、熒光強度、峰高),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在正常情況下,此標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該是一條通過原點的直線,但在實際測定時,常出現(xiàn)某一、二點偏離直線的情況,這時,用小二乘方回歸法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,就能得到合理的圖形。小二乘法計算,然后按回歸方程式計算結(jié)果,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 4、測定結(jié)果的校正 在食品分析中,常常因為系統(tǒng)誤差,使測定結(jié)果高于或低于檢測對象的實際含量,即回收率不是100%,所以需要在樣品測定的同時用加入回收法測定回收率,再利用回收率按下式對樣品的測定結(jié)果加以校正。

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編輯:小檀20180911