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粒細胞-巨嗜細胞集落刺激因子ELISA試劑盒ELISA試劑盒價格

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突破早期診斷大關(guān),對疾病診治的提升有著非同尋常的意義。

●分子實驗中常用生化試劑原理匯總● 5.在用乙醇沉淀DNA時,為什么一定要加NaAc或NaCl至終濃度達0.1~0.25mol/L?在pH為8左右的溶液中,DNA分子是帶負電荷的,加一定濃度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的負電荷,減少DNA分子之間的同性電荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀,當加入的鹽溶液濃度太低時,只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合,這樣就造成DNA沉淀不完全,當加入的鹽溶液濃度太高時,其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于過多的鹽雜質(zhì)存在,影響DNA的酶切等反應,必須要進行洗滌或重沉淀。 6.加核糖核酸酶降解核糖核酸后,為什么再要用SDS與KAc來處理?加進去的RNase本身是一種蛋白質(zhì),為了純化DNA,又必須去除之,加SDS可使它們成為SDS-蛋白復合物沉淀,再加KAc使這些復合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式的SDS-蛋白質(zhì)復合物,使沉淀更加完全。也可用飽和酚、氯仿抽提再沉淀,去除RNase。在溶液中,有人以KAc代替NaAc,也可以收到較好效果。 7.為什么在保存或抽提DNA過程中,一般采用TE緩沖液?在基因操作實驗中,選擇緩沖液的主要原則是考慮DNA的穩(wěn)定性及緩沖液成分不產(chǎn)生干擾作用。磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(pKa=7.2)和硼酸系統(tǒng)(pKa=9.24)等雖然也都符合細胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pH),可作DNA的保存液,但在轉(zhuǎn)化實驗時,磷酸根離子的種類及數(shù)量將與Ca2+產(chǎn)生Ca3(PO4)2沉淀;在DNA反應時,不同的酶對輔助因子的種類及數(shù)量要求不同,有的要求高離子濃度,有的則要求低鹽濃度,采用Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統(tǒng),由于緩沖液是TrisH+/Tris,不存在金屬離子的干擾作用,故在提取或保存DNA時,大都采用Tris-HCl系統(tǒng),而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定DNA的活性。 8.如何選擇聚乙二醇(6000)的濃度來沉淀DNA?采用PEG(6000)沉淀DNA,大小不同的DNA分子所用的PEG的濃度也不同,PEG的濃度低,選擇性沉淀DNA分子量大,大分子所需PEG的濃度只需1%左右,小分子所需PEG濃度高達20%。本實驗選擇性沉淀4.3kb的pBR322質(zhì)粒DNA,每毫升加入0.4毫升的30% PEG,其終PEG濃度為12%。PEG選擇性沉淀DNA的分辨率大約100bp。 9.抽提DNA去除蛋白質(zhì)時,怎樣使用酚與氯仿較好?酞與氯仿是非極性分子,水是極性分子,當?shù)鞍姿芤号c酚或氯仿混合時,蛋白質(zhì)分子之間的水分子就被酚或氯仿擠去,使蛋白失去水合狀態(tài)而變性。經(jīng)過離心,變性蛋白質(zhì)的密度比水的密度為大,因而與水相分離,沉淀在水相下面,從而與溶解在水相中的DNA分開。而酚與氯仿有機溶劑比重更大,保留在下層。作為表面變性的酚與氯仿,在去除蛋白質(zhì)的作用中,各有利弊,酚的變性作用大,但酚與水相有一定程度的互溶,大約10%~15%的水溶解在酚相中,因而損失了這部分水相中的DNA,而氯仿的變性作用不如酚效果好,但氯仿與水不相混溶,不會帶走DNA。所以在抽提過程中,混合使用酚與氯仿效果好。經(jīng)酚**次抽提后的水相中有殘留的酚,由于酚與氯仿是互溶的,可用氯仿**次變性蛋白質(zhì),此時一起將酚帶走。也可以在**次抽提時,將酚與氯仿混合(1:1)使用。

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檢驗原理:●本試劑盒利用膜免疫層析原理,采用競爭法,在硝酸纖維素膜的檢測線處包被BSA與25-OH維生素D3的偶聯(lián)物,在質(zhì)控線處包被兔抗綿羊IgG多克隆抗體,金標墊上固定膠體金標記的25-OH維生素D單克隆抗體。檢測時,首先用處理試劑將樣本中的25-OH維生素D與維生素D結(jié)合蛋白分離,游離的25-OH維生素D可與金標墊上的膠體金標記25-OH維生素D單克隆抗體發(fā)生結(jié)合形成免疫復合物,該免疫復合物與未結(jié)合的膠體金標記物在層析作用下沿膜同時移動,經(jīng)過檢測線時,未結(jié)合的膠體金標記物與偶聯(lián)物結(jié)合而顯色,經(jīng)過質(zhì)控線時,免疫復合物與未結(jié)合的膠體金標記物均能與兔抗綿羊IgG多克隆抗體而顯色。檢測線處顯色深淺反應樣本中25-OH維生素D的含量,由于樣本中的25-OH維生素D與檢測線處的BSA與25-OH維生素D3的偶聯(lián)物存在競爭關(guān)系,因此檢測線的顯色深淺與樣本中的25-OH維生素D是反比關(guān)系。通過已擬定的標準曲線可以由顯色的灰度值計算得到25-OH維生素D的含量。 產(chǎn)品特點:● 指尖末梢血、全血和血清樣本,滿足不同客戶需求 ● 樣本無需前處理,直接測定,僅需15分鐘可得結(jié)果 ● 可進行多樣本同時檢測,上機檢測僅需5秒鐘 ● 操作簡便快速,與美康膠體金免疫分析儀配套使用 臨床意義: ● 維生素D健康水平監(jiān)測 ● 骨質(zhì)疏松、骨關(guān)節(jié)炎病情監(jiān)測 ● 孕婦維生素D缺乏癥輔助診斷、療效評估 ● 青少年維生素D缺乏輔助診斷;佝僂病鑒別診斷 ● 高鈣血癥、維生素D中毒輔助診斷、療效監(jiān)測

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編輯:小檀20180906