突破早期診斷大關(guān),對疾病診治的提升有著非同尋常的意義。
引起 ELISA 測定結(jié)果與文獻(xiàn)報導(dǎo)不一致的原因主要有三點(diǎn),試劑因素、標(biāo)本因素和操作因素。 試劑因素:1. 試劑應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便的試劑。 2.不同廠家的試劑一定不能混用,包括底物和洗滌液。由于校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)有差異,還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應(yīng)等因素都會導(dǎo)致對樣本的檢測結(jié)果不一致。如:有的廠家酶標(biāo)板孔間 CV 值大于 20%,標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定性比較差,使用劣質(zhì)的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。 3. 要注意試劑的批號和出廠日期,雖然試劑的有效期多為 1 年,好選擇剛出廠的試劑盒。 4. 避免選擇假的 ELISA 試劑盒。有些廠家為夸大生產(chǎn) ELISA 的指標(biāo)范圍,用一種指標(biāo)來冒充其它指標(biāo),造成各種種屬、各種指標(biāo)都可以做的假象。 標(biāo)本因素和操作因素: 血清是常用的 ELISA 標(biāo)本,血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本,標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致,分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。 內(nèi)源性物質(zhì):有人認(rèn)為大約 40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。 外源性物質(zhì):外源性物質(zhì)常常是由于用于 ELISA 測定的血標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。
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ELISA方法可以分為兩類。**類:生物大分子的定量,**類:親和力測定評價或者篩選??贵w的穩(wěn)轉(zhuǎn)、瞬和發(fā)酵過程的表達(dá)量監(jiān)控,細(xì)胞因子的監(jiān)控,體內(nèi)抗體藥物的藥代動力學(xué),藥效生物標(biāo)志物的含量檢測和免疫原性測定等可劃分為**類使用目的,雜交瘤的滴度測定,噬菌體展示的淘選篩選,體外抗體和對應(yīng)靶點(diǎn)蛋白或細(xì)胞表面受體的親和力評價可劃分為**類使用目的。使用目的不一樣,即使使用同樣的試劑材料,也會有不同實(shí)驗(yàn)?zāi)J胶蛿M合曲線。下面小編將以某抗體的定量的方法開發(fā)(**類目的)和親和力檢測方法開發(fā)(**類目的)為例,對不同使用目的開發(fā)策略進(jìn)行介紹。
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編輯:小檀20180906
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